Terapia Epigenómica en Cáncer de vesícula

TEMA: El inhibidor de BRD4 y el inhibidor de histona desacetilasa inhiben sinérgicamente la proliferación del cáncer de vesícula biliar in vitro e in vivo

MECANISO: Inhibición de histonas desacetiladas

Como se hizo: Se utilizó  inhibidor JQ 1 de BRD 4 y el ácido hidroxámico suberoilanilida inhibidor de histona desacetilasa (SAHA) inhibieron sinérgicamente las células GBC in vitro e in vivo.

Resultados :

JQ 1 y SAHA inhibió significativamente la proliferación, la viabilidad celular y la metástasis, e indujo la apoptosis y la detención de G2 / M en las células GBC

In vivo, los volúmenes y pesos de los tumores de los modelos de xenoinjerto de GBC disminuyeron significativamente después del tratamiento conJQ 1 o SAHA ; mientras tanto, el cotratamiento mostró el efecto más fuerte.

Efectos anticancerígenos anteriores se asociaron con la regulación a la baja de BRD 4 y la supresión de las rutas de PI 3K / AKT y MAPK / ERK .

Estos hallazgos destacan a JQ 1 y SAHA como agentes terapéuticos potenciales y su combinación como una estrategia terapéutica prometedora para GBC

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6676267/

Técnicas de Edición de Ácidos Nucleicos en Cáncer de Vesícula Biliar

El cribado CRISPR de todo el genoma identifica a ELP5 como un determinante de la sensibilidad a la gemcitabina en el cáncer de vesícula biliar

TEAN: CRISPR/ Cas9         Somática

Tipo de Edición: Ex vivo

Dirigido hacia: ADN

Dirigido por: Nucleasa Cas9 y ARN de guía única (sgRNA)

Órgano a tratar: Vesícula

Resultados a corto, mediano y largo plazo:

La pérdida de ELP5 contribuye a la resistencia a la gemcitabina al reducir la traducción del ARNm de P53 impulsada por el sitio de entrada ribosómico interno (IRES) y la apoptosis de una manera dependiente de P53. Además, descubrimos el papel clave y el mecanismo del eje aberrante Elongator / hnRNPQ / P53 en la resistencia a la gemcitabina de las células GBC y proporcionamos biomarcadores para predecir la sensibilidad a la gemcitabina y los resultados de supervivencia en pacientes con GBC

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6889377/

Inmunoterapia una área más desarrollada en terapia celular

Tipo de células madre: Anticuerpo monoclonal (Imfinzi)

Método de obtención: células de mamífero (ovario de hámster Chino) mediante tecnología de ADN recombinante

Vía de administración: Perfusión intravenosa

Resultados: Dos personas con cáncer de hígado (20%) y una persona con cáncer del tracto biliar (8,3%) lograron respuestas parciales. No hubo respuestas completas. Cinco personas con CHC (50%) y cinco con cáncer del tracto biliar (41,7%) tenían una enfermedad estable, lo que significa que ni mejoraron ni empeoraron. Al sumar estos números, la tasa de control de la enfermedad fue del 70% para el CHC y del 50% para el cáncer del tracto biliar.

https://cima.aemps.es/cima/dochtml/ft/1181322001/FT_1181322001.html

https://asscat-hepatitis.org/las-combinaciones-de-inmunoterapia-son-prometedoras-para-el-cancer-de-higado/

 Ejemplo de transgénico  animal

TEMA Diferencias genéticas entre las subcepas C57BL / 6

TIPO DE ANIMAL TRANSGÉNICO ratones knockout (ratones C57BL / 6J)

MÉTODO POR EL QUE FUE OBTENIDO LA CLONACIÓN DE GENES Apareamiento entre hermanos durante 20 o más generaciones consecutivas. Presentaron deleción en el exón 7-11 del gen Nnt

PARA QUE ES USADO es una de la cepas endocriadas más ampliamente usadas y la primera en tener su genoma completamente secuenciado. A pesar de que es refractaria a desarrollar varios tipos de tumores, tiene un fondo genético permisivo que permite máxima expresión de la mayoría de las mutaciones. Es resistente a convulsiones audiogénicas, tiene una relativa baja densidad ósea, y desarrolla sordera con la edad. Son susceptibles a la obesidad inducida por dieta, diabetes tipo 2, y aterosclerosis. Sus macrófagos son resistentes a los efectos letales de la toxina anthrax.

https://www.jstage.jst.go.jp/article/expanim/58/2/58_2_141/_pdf/-char/en

http://pasteur.uy/wp-content/uploads/2018/07/Info-Cepas-de-roedores_IPMon.pdf

Ventajas de los transgénicos

UTILIZACIÓN DE ALIMENTOS Y MEDICAMENTOS INOCUOS Y DE CALIDAD

• Hoy dia. una gran variedad de alimen-tos procesados y naturales de origen transgénico, producidos por 28 paises y consumidos por cientos de millones de seres humanos y miles de millones de animales, se comercializan internacionalmente en los mercados y supermercados.

 • Los organismos genéticamente modificados (OGM) han permitido la generación y respectiva utilización de más de 100 medicamentos y vacunas transgénicas. los cuales no existirían sin los OGM.

SUSTENTABLE DE ALIMENTOS

• Gracias a las plantas transgénicas, en el campo se puede reducir significativamente el uso de insecticidas químicos sintéticos, muchos de ellos recalcitrantes e importan-tes contaminantes de los suelos y mantos freáticos.

BIODIVERSIDAD

• Por ser organismos creados por procesos de transferencia horizontal de ADN, similares a los que han ocurrido y ocurren en la naturaleza, los OGM son organismos con niveles de riesgo similares a los que ya existen en los procesos naturales de la biota.

• No existe contaminación ni evidencia de daño a las variedades nativas y convencionales por plantas transgénicas; existe coexistencia.

                                    Desventajas de los transgénicos

-No se sabe aún si estas nuevas especies son más invasivas que las convencionales y por lo tanto pueden alterar seriamente al ecosistema. Ponen en peligro la biodiversidad porque se eliminan organismos de la naturaleza.

-El cruce de genes puede provocar la resistencia de las bacterias a antibióticos.

-Hongos y virus pueden mutar hacia especies desconocidas para autoprotegerse.

-Hay sospechas de que pueden afectar a la fertilidad.

-Según Greenpeace un estudio de laboratorio con ratas detectó que estas se reproducían menos si eran alimentadas con transgénicos.

https://www.conacyt.gob.mx/cibiogem/images/cibiogem/comunicacion/publicaciones/TransgenicosCoordinadorFBolivar.pdf

https://www.lavanguardia.com/comer/materia-prima/20180424/442902035279/transgenicos-pros-contras.html

Ejemplo de ADN recombinante artificial en el cáncer de vesícula biliar

Durvalumab es un anticuerpo monoclonal de inmunoglobulina G1 kappa (IgG1κ) humana y un nuevo inhibidor de los puntos de control inmunológico para el tratamiento del cáncer. Producido mediante tecnología de ADN recombinante en cultivo en suspensión de células de ovario de hámster chino (CHO). Durvalumab, pueden bloquear el crecimiento tumoral de diferentes formas al dirigirse a determinadas células. La administración de puede funcionar mejor en el tratamiento de pacientes con cáncer de hígado, páncreas, vías biliares o vesícula biliar.

https://go.drugbank.com/drugs/DB11714

https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT03257761

Ejemplo de ADN recombinante en la naturaleza

El virus papiloma humano (VPH) corresponde a un virus ADN, que infecta piel y mucosas, altamente especie específico. Un evento central para la transformación de las células infectadas es la integración del genoma viral al de la célula huésped, proceso que ocurre en el estrato espinoso y en el que destaca por su importancia, el ADN de los VPH de alto riesgo oncogénico. Durante este proceso se altera la región de lectura abierta ORF- E2, perdiéndose el efecto inhibitorio sobre el promotor P97 o P105, que mantenía bloqueada la expresión de las proteínas E6 y E7, las que son ahora sintetizadas sin restricción vía factores de transcripción

https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717-75262006000200011

 NGS en el Cáncer de Vesícula

La secuenciación de próxima generación (NGS) examina la secuencia de codificación completa de genes relacionados con el cáncer y puede puede ser una plataforma útil para identificar mutaciones novedosas para terapia dirigida. Este método de secuenciación examina un panel más amplio de aberraciones genéticas en un número limitado de casos de cáncer de vesícula biliar. Se observara mutaciones en donde  P53 fue el más común y hubo una preponderancia relativa de mutaciones que involucran la vía de la quinasa PI3: STK11, RICTOR, TSC2 .

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4428571/

 PCR en tiempo real en el cáncer de vesícula biliar

El ARN de tejidos se aísla, posteriormente se transcribe en ADNc mediante transcripción inversa  y la plantilla de ADNc utilizando el kit Primer-Script de RT-PCR de un paso  y el kit SYBR Premix Dimmer Eraser. La expresión génica se normalizó a la expresión de GADPH. Las secuencias de cebadores se enumeran de la siguiente manera: GAPDHF, 50 -CGGAGTCAACGGATTTGGTCGTAT-30, GAPDH-R, 50 -AGCCTTCTCCATGGTGGTGAAGAC-30; LncRNA AFAP1-AS1-F, 50 -AATGGTGGTAGGAGGGAGGAACAGG-30 y 50 -AATGGTGGTAGGAGGGAGGAACAGG-30 LncRNAAFAP1-AS1-R, 50 -AGAGTGTCCTCCTCCACCAA-30; Twist1- F, 50 -GGAGTCCGCAGTCTTACGAG-30, Twist1-R, 50 -CCAGCTTGAGGGTCTGAATC-30; E-cadherina, 50 -GAGTCC-cadherina, 50 -GAGTCC-cadherina, 50 -GAGTCC-cadherina, 50 -GAGTCC-cadherina, 50 -GAGTCC-cadherina- 30; Vimentina-F, 50 - AGATGGCCCTTGACATTGAG-30; Vimentina-R, 50 -CCAGAGGGAGTGAATCCAGA-30.

Se usa QRT-PCR para examinar el nivel de ARNm en casos de tejidos de cáncer de vesícula biliar y tejidos normales adyacentes. Para realizar el  RT-PCR en tiempo real se utiliza una máquina de PCR ABI7500 .

https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0753332216313452

 

Alteraciones en la Epigenómica del Cáncer de Vesicula

Los mas importantes componentes del código epigenético que actúan como represores de la transcripción son: la metilación del DNA, modificación de las histonas y mecanismos alterados en la regulación mediante microARNs.

Un mecanismo epigenético del proceso carcinogénico es la hpermetilación. En 109 cánceres se encontró una metilación de ciertos genes como p73, MGMT, DCL1 y en menor frecuencia CDH13, FHIT. Los genes DAPK1, DLC1, TIMP3 y RARb2 muestra un progresivo incremento en su estado de metilación desde colecistitis crónica sin metaplasia a carcinoma avanzado que invade la capa serosa.

Además, el incremento de p15, APC, DLC1 y CDH13 se relaciona con un peor pronóstico de sobrevida. Esto indica el rol fundamental que cumple este proceso epigenético en la carcinogénesis vesicular.

https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-98872010000500011

 

Alteración en la traducción

La traducción se encarga de la lectura del ARNm que se obtuvo en la transcripción. Si el ADN que codifica un gen se modifica provocará una alteración de ARNm resultante, el momento que los ribosomas leen esta molécula origina errores en la traducción produciendo una proteína que no cumple correctamente su función o completamente disfuncional. Se debe destacar que muchos ARNm relacionados con el cáncer evidencian una distribución alterada de los ribosomas, con una mayor proporción de unión a la región 5' UTR en el caso de células pre-neoplásicas.

https://www.cancerquest.org/es/biologia-del-cancer/mutacion

https://www.savalnet.cl/cienciaymedicina/progresosmedicos/un-extrano-mecanismo-cancerigeno-de-sintesis-proteica.html

Alteraciones en la transcripción en el cáncer de vesícula biliar

La familia de oncogenes llamados ras (H-ras, N-ras y K-ras) son más frecuentes en las neoplasias de los humanos. Estos genes codifican para una proteína GTP-asa que participan en la vía de transducción de señales de crecimiento y diferenciación celular. Un gran porcentaje de las mutaciones de este gen se localiza en el codón 12, y en una frecuencia menor en los codones 13,60,61. El resultados en diferentes estudios ha demostrado que este el gen K-ras estaría activado y juega un rol en la carcinogénesis vesicular tempranas.

Los métodos utilizados para la detección de la mutación de este gen son:

·         PCR combinada con el uso de enzimas de restricción (RFLP)

·         Polimorfismo conformacional de cadena simple (SSCP)

·         Electroforesis en gel con gradiente denaturante (DGGE) seguido de secuenciación

https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-98872004000800007

https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-98872014001100007#:~:text=KRAS%20es%20un%20proto%2Doncog%C3%A9n,prote%C3%ADna%20GTPasa%20del%20mismo%20nombre.

 ¿Cuál es la causa genética del cáncer de vesícula biliar?

El cáncer de vesícula biliar se puede producir por una mutación en el material genético (ADN), el cual pude ser heredado de los padres, aunque tenga una incidencia baja, o adquirido durante la vida de una persona, como por ejemplo por una inflamación crónica, un cambio genético aleatorio o por causas desconocidas.  Principalmente esta alteración provoca la activación de genes llamados oncogenes que controlan el crecimiento de las células, la división y la muerte, de igual manera desactivan genes supresores de tumores que ralentizan la división celular o hacen que las células mueran en el momento adecuado. Los cambios adquiridos en el gen supresor de tumores TP53 son los que se localizan en muchos casos de cáncer de vesícula biliar, otros genes que se involucran en este cáncer son KRAS, BRAF y PIK3CA.

https://www.cancer.org/cancer/gallbladder-cancer/causes-risks-prevention/causes.html

 Cáncer de Vesícula

La vesícula es un órgano fibromuscular que cumple la función de almacenar la bilis producida por el hígado, presenta un aspecto piriforme y se encuentra localizada en la cara visceral del hígado. 

El cáncer de vesícula biliar es una enfermedad en que se forma células cancerosas en los tejidos del órgano. Es poco frecuente y difícil de detectar,  motivo por el cual los pacientes tienen pronósticos desalentadores por estar en etapas avanzadas  al momento de su detección, sin embargo la probabilidad de cura es alta si se encuentra en etapas iniciales. Los signos y síntomas que se presentan con más frecuencia son: Dolor e hinchazón abdominal, ictericia, náuseas y fiebre. 

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Bienvenidos a mi Blog personal. Soy estudiante de tercer semestre de la Universidad Central del Ecuador, he creado este espacio para desarrollar temas relacionados con Biología Molecular y Celular, en el cual subiré nueva información cada semana. Espero que este sitio web sea de su agrado y saques el mejor provecho del contenido.